Рекомендации ЦКП
Для получения наилучших результатов при секвенировании ДНК необходима качественная очистка реакционной смеси от невключившихся флюоресцентно меченных BigDye-ddNTP. Как правило, применяются два основных метода в разных вариантах: спиртовое осаждение и гель-фильтрация. Первая отличается простотой, но требует большей тщательности и аккуратности. Вторая отличается дороговизной фирменных колонок (Centricep Spin Columns - ~4$/шт по каталогу Princeton Separation Inc.; AutoSeq - ~2.82 Euro/шт по каталогу Amersham Pharmacia Biotech и SigmaSpin Post reaction Clean Up Columns - ~2.5$/шт, по каталогу Sigma).
Нами успешно используются два протокола очистки реакций секвенирования ДНК от невключившихся BigDye-ddNTP:
- гельфильтрация через приготовленные самостоятельно колонки с сорбентом Sephadex G-50 Superfine
- осаждение изопропанолом
